blotting
Impreza plenerowa w KieĹpinie 22 kwietnia 2007
hej,pamięta ktoś kolejność próbek z blota? (nie 'błota'
)gr. a/1 :>
tak, martynka, powiem jej żeby napisała.
Kolejność w Westernie: 1) DH5alfa 2) DH5alfa + plazmid, przed indukcją 3) marker NB 4-8 ) grupa Agnieszki [kolejność nanoszenia FRNr, FR, NZ, E1, E2], 9-13) grupa Roberta, 14-18 ) Asia i Cień
Kolejność w żelu do barwienia CB: 1) DH5alfa 2) DH5alfa + plazmid, przed indukcją 3) marker NB 4-8 ) Cień, 9) wolna studzienka 10-14) Ola, Gosia i ja, 15-19) Aga
dzięki!
eee, nie kumam :< albo źle studzienki numeruję, albo ten blot się nie zgadza z tym, co podałaś, Martyna. Pisałaś o markerze nb (nie barwionym czyli), ale użyliśmy przecież barwionego, który w dodatku jest w 2giej (17tej - zależy z której strony liczyć) studzience, a nie 3ciej
albo mi się coś ostro pochrzaniło
na pewno jest w trzeciej, w pierwszej są kk nietransformowane od nich, a w drugiej nietransformowane nasze, które nanosiła asia n.
Chyba że mnie pamięć zawodzi..
jak patrzysz na skan błony, to Ci się zgadza? bo to co napisałem opieram na wyglądzie skanu
no nie, masz rację
coś dziwnego tam jest ;pMam napisane tak, jak było mówione, ale to rzeczywiście wygląda dziwnie: jakby był nałożony i marker, i bakterie. Ten kto nakładał, na pewno wie, co tam jest.
chodzi o to że dwie pierwsze studzienki się w sumie zlały już na żelu a do studzenki z markerem się odrobinę przelało
czy dziewczyny co robiły płukania mogły by napisać co było zmienione??
i Robert i Grzesiek napisać jak robili bufor do pół-mokrego transferu??
więc dwie zmiany właściwie były:
- wszystkie płukania tylko w TBS, nigdy z mlekiem
- substrat do alkalicznej fosfatazy robiony w buforze do alkalicznej fosfatazy, a nie w TBS (na 30ml buforu AF)
nie wiem jak was ale mnie to wszystko wkurza bo zamiast sie skupic na uczeniu na kolo to sie stresuje sprawkiem, a tu jest totalny burdel bo kazda osoba robila inny bufor i nikt nikomu nie podaje zadnych danych(to dotyczy takze i mnie - bo ja tez cos robilam i ich nie umiescilam) nie ma szans tego samemu wydedukowac bez znajomosci stockow. a czemu to wszystko pisze, bo chce was sie zapytac co sadzicie o tym zeby im powiedziec ze nie dalismy rady przygotowac dobrych sprawozdan i jeszcze sie nauczyc na kolo i zeby oddac je im dopiero w srode-czwartek. napisac maila moge z pytaniem do dawida o to jak chcecie?
ja jestem za - w sumie sam nie pamiętam co zmienialiśmy w buforze do transferu, nawet nie jestem pewien czy robiłem go ja czy Grzesiek; w sprawku napisałem tylko, że używaliśmy "buforu do transferu" i tyle
@Aś: dzięki!
i tak co się wywiedziałam - pytania były przewidywalne, zadanie obliczeniowe nieskomplikowane, wszystko dotyczyło głównie konkretnie tego co się na labach działo, czyli nie warto czytać gratisów tylko protokoły i to co w sprawkach ewentualnie =)
tylko nie wiem czy to dotyczy wszystkich grup ;/
moze byc, w sumie robilismy przeciez transfer mokry a nie pol-suchy i bufor to bylo TBS (albo PBS) po prostu 1x stezone (stockiem bylo 2x stezone chyba). Robert - to bylo to co zrobilsmy 900ml zamiast litra bo stocku bylo za malo.
a, to tak, robiliśmy to razem. na pewno było na końcu 1x stężone, ale głowy za rodzaj buforu nie dam sobie uciąć
jestem za